如何应用错配引发和重叠延伸PCR，在目的基因序列内部引入点突变？
如何应用错配引发和重叠延伸PCR，在目的基因序列内部引入点突变？
发布时间：2025-03-04 04:03:04
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答案：【计分规则】: ①设计4条引物，包括目的基因两个末端序列的上游引物（Pa）和下游引物（Pd），以及在突变位点的下游引物（Pb）和上游引物（Pc）。②Pb和Pc序列完全反向互补，含有突变碱基。③利用Pa和Pb进行PCR扩增，获得带突变的目的基因的5’端片段。④利用Pc和Pd进行PCR扩增，获得带有突变的目的基因的3’端片段。⑤以上述PCR产物混合为模板，Pa和Pd引物组合，通过重叠延伸PCR，获得带有突变的全长目的基因。
