免疫检测高背景的原因有哪些？如何解决？
免疫检测高背景的原因有哪些？如何解决？
发布时间：2025-06-21 09:43:56
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答案：【计分规则】: ① 封闭不完全。解决方法：封闭液要与印迹膜的类型相匹配；例如封闭 PVDF膜需要使用应用广泛的脱脂牛奶，按需要量增加封闭液的浓度和封闭时间；封闭液必须是一个纯蛋白；封闭液通常会被与探针非特异结合的物质所污染。（1分）② 清洗不充分。解决方法：增加清洗次数、时间以及清洗剂的去污力；在清洗时加入少量表面活性剂如SDS比NP-40的去污力强，NP-40比Tween-20强；在抗体缓冲液中加入Tween-20会降低非特异结合。（1分）③ 印迹膜在底物溶液中放置时间过长。解决方法：当信噪比较得当时，取出印迹膜；反应时间不宜过长，并立即置于ddH2O中终止反应。（1分）④ 电泳或转印过程中污染。解决方法：重新更换凝胶和转印缓冲液；更换或彻底清洗转印槽中污染的纤维衬垫。（1分）⑤ 凝胶上的蛋白样品过载或在转印缓冲液中使用了过多的SDS，蛋白直接穿透印迹膜并在转印体系中循环而不能结合在印迹膜上。解决方法：降低蛋白的上样量或降低缓冲液中的SDS，再附加一张膜以结合过量蛋白。（1分）⑥ 一级或二级抗体浓度过高。解决方法：增加抗体稀释倍数，采用斑点印迹技术筛选合适的浓度。（1分）⑦ 孵育槽被污染。解决方法：清洗孵育槽或使用一次性孵育槽。（1分）
