RNAi的作用机制及其在实际中的应用?
RNAi的作用机制及其在实际中的应用?
发布时间：2025-05-22 14:53:12
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答案：答:RNAi的作用机制如下:①siRNA的形成阶段:此阶段需要Rde-1,Rde-4和dsRNA特异性的核酸内切酶Dicer等共同参与。Rde-1,4编码的蛋白识别外源dsRNA,引导dsRNA与Dicer结合,然后,Dicer将dsRNA解旋,再将其裂解为21-25 nt大小的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)。② RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silicencing complex,RISC)形成阶段:生成的siRNA和RNAi特异性酶如AGO-2、MUT-7、RED-1、PAZ蛋白和DNA-RNA螺旋酶结合形成RISC,具有序列特异性核酸内切酶、核酸外切酶和解旋酶活性,能特异地降解与siRNA同源的靶mRNA。③效应阶段: siRNA引导RISC与同源性的mRNA结合,在ATP及解旋酶(如qde-3,mut-6,mut-14)的作用下使siRNA链解离,并使RISC由250kD大小的前体形式变成约100kD左右活性形式,同时解旋酶催化同源mRNA与siRNA的正义链相互交换,核酸酶在mRNA与反义RNA所形成的双链区的5′起始端下游7-10个核苷酸处切断mRNA,起到特异的抑制基因表达的效果。④扩增阶段:该反应以siRNA中的一条链为引物,以靶mRNA为摸板,在RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)作用下,扩增靶mRNA,产生新的二级siRNA,而这些siRNA又能继续反作用于靶mRNA。RNAi在实际中的应用:1.基因功能分析。利用RNAi技术敲除某一基因,研究此基因的功能。2 .RNAi还可以作为寻找新的药物靶标的工具,可以高通量地发现药物靶基因,帮助新药物的研究和开发,了解药物作用的生化模式等。3. 基因治疗, RNAi只抑制致病基因,而不影响正常等位基因的功能,具有较高的选择性和特异性,能减少非特异作用引起的副作用。4. 研究信号传导通路的新途径, 联合利用传统的缺失突变技术,RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系.
